L'Ispettore Ottozampe e il Mistero dei Misteri, film diretto da Julio Soto Gurpide, racconta la storia di un piccolo ragno, l'Ispettore Ottozampe, molto simpatico ma al tempo stesso anche molto goffo. Nonostante risolva diversi casi, combina un guaio dietro l'altro; infatti, dopo aver distrutto un edificio, è stato espulso dal corpo di Polizia.
Ora Ottozampe ha deciso di prendersi un lungo periodo di meritata vacanza. Salito su un lussuoso volo per San Francisco, l'ispettore non immagina, però, che il suo rilassante viaggio neanche avrà inizio. Un ricco ospite, il medico Biugsy, pare esser scomparso nel nulla durante la luna di miele con sua moglie, la vedova nera Arabella. Sarà compito dell'ispettore Ottozampe risolvere il caso e scoprire cosa sia realmente accaduto al dottore.